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Diagnóstico y seguimiento de cáncer de piel no-melanoma utilizando 99mTc-MIBI; estudios en un modelo animal

Materiales y métodos

Animales y modelo tumoral.

Todos los estudios que involucran animales se realizaron según los principios y guías de la “Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, U.S. National Research Council, 1996”.

El modelo tumoral utilizado fue el de carcinogénesis completa (10,11). Para ello, 38 ratones hembra de la cepa Sencar (CNEA, Argentina) de 7 a 9 semanas de vida fueron cuidadosamente afeitados en el área dorsal. Luego de un período de reposo de 2 días y sólo en aquellos animales que no presentaron crecimiento piloso, se comenzó el esquema de carcinogénesis. Las espaldas de los animales fueron topicadas con 7, 12-dimetilbenz(a)antraceno DMBA (25 μg en 0.2 mL acetona/ratón, Sigma Chemical Co., St. Louis, USA) dos veces por semana durante 16 semanas. El peso y el consumo de agua y alimento fueron registrados semanalmente a lo largo del esquema de inducción.

Preparación y administración del radiofármaco.

El 99mTc-MIBI se obtuvo por marcación del metoxiisobutilisonitrilo (sestamibi 0,5 mg, Laboratorios Bacon S.A.I.C., Argentina) con 30 mCi de 99mTcO4- provenientes de un eluído fresco de un generador 99Mo-99mTc (Laboratorios Bacon S.A.I.C., Argentina). La pureza radioquímica del radiofármaco elaborado fue determinada de acuerdo a la monografía correspondiente (12).

La administración del 99mTc-MIBI se realizó por vía endovenosa o subcutánea, según corresponda, inyectando 1 mCi del radiofármaco en un volumen máximo de 0.1 mL.

Puesta a punto del ensayo de captación de 99mTc-MIBI.

Finalizado el esquema de inducción tumoral, transcurrieron 2 semanas hasta que los animales fueron divididos en 2 grupos (n=10 cada uno) según la vía de administración a ensayar: endovenosa (EV) ó subcutánea (SC). A su vez, cada grupo fue subdividido en 2 subgrupos para evaluar distintos tiempos de biodistribución del radiofármaco: 15 y 30 minutos. De esta manera, se obtuvieron 4 grupos de estudio, EV15, EV30, SC15 y SC30 que fueron inyectados con el radiofármaco y sobre los cuales se realizó la eutanasia de los animales a los tiempos establecidos para determinar la biodistribución del 99mTc-MIBI. La disección consistió en la extracción de: tumores, piel sana (tomada de un sector no expuesto al esquema de carcinogénesis), sangre, hígado, riñones, corazón, pulmones, colon y páncreas. Los órganos fueron lavados, pesados y medidos en un contador de centelleo sólido (CCS) calibrado y ajustado para la ventana de medición del 99mTc. Se registraron las tasas de conteo (TC) en cuentas por minuto (cpm) obtenidas en cada medición. La preparación y medición de un patrón de 99mTc en idénticas condiciones que las muestras, se utilizó para conocer la eficiencia de medición y convertir las TC obtenidas en valores de actividad (A) expresada en mCi, según la siguiente fórmula:

TC (cpm) = A(mCi) x eficiencia

Los resultados fueron expresados como concentración de actividad porcentual (CA%) y porcentaje de actividad inyectada por masa de tejido expresada en gramos (%Ainy/g), según las fórmulas que se detallan a continuación:

CA% = TC (cpm) tejido de interés; 100
TC (cpm) todos los órganos extraídos

Evaluación de la captación de 99mTc-MIBI para tumores de distinto tiempo de progresión.

Finalizado el esquema de inducción tumoral, transcurrieron 2 y 6 semanas hasta que otro grupo de animales (n=20 y n=18, respectivamente) fueron sometidos al ensayo de captación de 99mTc-MIBI. Para ello se administró 1 mCi de 99mTc-MIBI en un volumen máximo de 0,1 mL por vía EV. Luego de 30 minutos de biodistribución, los animales fueron eutanasiados y se extrajeron muestras de tumor y piel sana que fueron lavadas, pesadas y medidas en un CCS calibrado y ajustado a la ventana de medición del 99mTc al igual que lo que se describió en el ensayo anterior. Los resultados de la biodistribución se expresaron como CA% y %Ainy/g como se explicó en el ensayo anterior.

Análisis histológico.

Las muestras de piel sana y tumores obtenidas de todos los ensayos de captación de 99mTc-MIBI fueron inmediatamente fijadas en formaldehído al 10% en PBS. Luego fueron procesadas de acuerdo a técnicas estándar de inclusión en parafina y corte en secciones de 3 μm. La coloración utilizada para evidenciar las estructuras histológicas fue hematoxilina-eosina (H&E). Todas las muestras fueron analizadas al microscopio óptico a diferentes aumentos para la realización del diagnóstico histopatológico y se tomaron microfotografías a modo ilustrativo.